以下是?植物植物β-葡萄糖苷酸酶(β-GUS)ELISA試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)操作流程及關(guān)鍵要點(diǎn)：

　　BS-5023 植物β-葡萄糖苷酸酶(β-GUS)ELISA試劑盒

　　一、實(shí)驗(yàn)原理?

　　采用?雙抗體夾心法?：包被抗體捕獲樣本中的GUS后，加入HRP標(biāo)記檢測(cè)抗體形成復(fù)合物，TMB顯色(藍(lán)色→黃色)，450nm波長(zhǎng)下OD值與GUS濃度正相關(guān)。

　　二、樣本處理?

　　組織提取?：

　　取5-50mg葉片/愈傷組織，加入GUS緩沖液勻漿，16000×g離心15分鐘取上清。

　　蛋白濃度調(diào)整為0.1mg/mL后立即檢測(cè)或-80℃保存。

　　保存要求?：

　　避免使用含NaN3的樣本(抑制HRP活性)。

　　短期保存于-20℃，避免反復(fù)凍融。

　　三、操作步驟?

　　加樣?：

　　空白孔不加樣，標(biāo)準(zhǔn)孔加梯度標(biāo)準(zhǔn)品(如1.0ng/mL起始)，樣本孔加50μL(需預(yù)稀釋時(shí)計(jì)算稀釋倍數(shù))。

　　溫育?：

　　37℃孵育30分鐘，手工洗滌時(shí)需拍干，推薦使用含0.05%吐溫-20的洗滌液。

　　顯色?：

　　加入TMB避光顯色15分鐘，終止后15分鐘內(nèi)讀取OD值。

　　四、注意事項(xiàng)?

　　試劑管理?：

　　使用前室溫平衡30分鐘，不同批號(hào)試劑禁止混用。

　　底物B需嚴(yán)格避光，避免接觸金屬器械。

　　操作控制?：

　　加樣需精準(zhǔn)(推薦排槍)，避免氣泡或孔壁殘留。

　　顯色后若標(biāo)準(zhǔn)孔OD值異常，需檢查溫育溫度或洗滌效果。

　　五、性能參數(shù)?

　　靈敏度?：檢測(cè)濃度≤1.0ng/mL。

　　重復(fù)性?：板內(nèi)/板間變異系數(shù)<10%。

　　如需GUS染色實(shí)驗(yàn)方案(如X-Gluc法)，可進(jìn)一步說(shuō)明需求。

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