EdU-488細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒(適用于FACS、FM)

產(chǎn)品信息 

產(chǎn)品描述

      EdU-488細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒(FuHeng EdU Cell Proliferation Kit with AlexaFluor 488)，是一種利用核苷滲入法對(duì)細(xì)胞增殖情況進(jìn)行快速、 簡(jiǎn)單、高靈敏檢測(cè)的試劑盒。其原理為：試劑盒中的EdU(5-ethynyl-2' -deoxyuridine)是一種胸苷(T)類(lèi)似物，EdU可以在在 細(xì)胞周期的S期中替代胸苷摻入到新合成的DNA中；另一方面，EdU上的乙炔基能與疊氮 化物(如熒光探針Alexa Fluor 488 Azide)通過(guò)Cu+的催化發(fā)生共價(jià)反應(yīng)，形成穩(wěn)定的三唑 環(huán)，該反應(yīng)非常迅速，被稱(chēng)作點(diǎn)擊反應(yīng)(Click reaction) (圖1) 。通過(guò)點(diǎn)擊反應(yīng)，新合成的DNA會(huì)被綠色熒光標(biāo)記，然后通過(guò)檢測(cè)熒光信號(hào)實(shí)現(xiàn)細(xì)胞增殖的檢測(cè)。

圖1. EdU法中的點(diǎn)擊反應(yīng)原理圖。 摻入到細(xì)胞DNA中的EdU與熒光探針或sws等標(biāo)記的疊氮化物，在銅離子的催化下發(fā)生共價(jià)反應(yīng)，形成穩(wěn)定的三唑環(huán)，使細(xì)胞DNA標(biāo)記上熒光探針或sws。

<p    細(xì)胞增殖檢測(cè)是評(píng)估細(xì)胞活性、遺傳毒性及抗腫瘤藥物效果等的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)手段。 細(xì)胞增殖檢測(cè)的方法按照原理通常可以分為五類(lèi)：膜損傷檢測(cè)、代謝活性檢測(cè)、ATP水平測(cè)定、 DNA合成檢測(cè)和細(xì)胞熒光標(biāo)記檢測(cè)法。目前的的檢測(cè)細(xì)胞增殖的方法是直接檢測(cè)細(xì)胞中DNA的合成，即核苷滲入法。以前常用的核苷滲入法是BrdU(胸腺嘧啶核苷酸類(lèi)似物)法，但BrdU法的缺點(diǎn)是需要變性DNA后才能與抗體結(jié)合，導(dǎo)致了DNA雙鏈結(jié)構(gòu)的破壞，影響了其他染料的結(jié)合染色，導(dǎo)致染色彌散，準(zhǔn)確性降低等問(wèn)題。 EdU法作為新型的核苷滲入法具有以下優(yōu)點(diǎn)：

◆安全-----不使用[3H]thymidine，無(wú)放射性污染。

◆ 簡(jiǎn)單-----基于小分子化學(xué)反應(yīng)的檢測(cè)方法，簡(jiǎn)單高效，僅需三步： EdU孵育；細(xì)胞固定；熒光檢測(cè)。無(wú)需DNA變性和孵育抗體。

◆ 快速-----無(wú)需過(guò)夜，省卻抗原抗體反應(yīng)。整個(gè)檢測(cè)過(guò)程只需 2.5 小時(shí)，大大縮短實(shí)驗(yàn)周期。

◆ 準(zhǔn)確-----標(biāo)記率高且無(wú)需DNA變性(酸解、熱解、酶解等)，可有效避免變性帶來(lái)的樣品損傷，確保細(xì)胞核邊緣清晰完。

◆ 靈敏-----無(wú)需抗體，檢測(cè)染料僅為BrdU抗體的1/500，更容易擴(kuò)散，即使單個(gè)增殖細(xì)胞也能準(zhǔn)確檢測(cè)。

◆ 兼容-----對(duì)樣品幾乎無(wú)損傷，允許與多種抗體或熒光蛋白同時(shí)標(biāo)記，能夠同時(shí)檢測(cè)細(xì)胞其他性狀特征。

本試劑盒適用于培養(yǎng)的細(xì)胞或組織樣品，也適用于組織切片，可以檢測(cè)到細(xì)胞或組織樣本中的單個(gè)增殖細(xì)胞，也可以對(duì)細(xì)胞或組織樣本總體的細(xì)胞增殖情況進(jìn)行定量分析。本試劑盒包含EdU法檢測(cè)所需要的所有組份，同時(shí)提供了藍(lán)色細(xì)胞核染料Hoechst 33342，可以用來(lái)復(fù)染所有細(xì)胞核，也可用于細(xì)胞周期分析。使用本試劑盒所做結(jié)果可以用熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡、流式細(xì)胞儀或熒光酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測(cè)， 也可以用于高內(nèi)涵篩選(High-Content Screening, HCS)。

光譜特性：488-Azide：綠色熒光，Ex/Em=491/518 nm；Hoechst 33342：藍(lán)色熒光， Ex/Em=346/460nm, bound to DNA。

產(chǎn)品組分

運(yùn)輸和保存方法

-20℃保存， 一年有效。488-Azide和Hoechst 33342(1000X)須避光保存。

使用方法

1. 需自備試劑

（1）10mM PBS, pH7.2-7.6

（2）固定液-----4%多聚甲醛in PBS 。

（3）洗滌液-----3% BSA in PBS , pH7.2-7.6。

（4）通透液-----0.3~0.5% Triton X-100 in PBS。

（5）去離子水或超純水。

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