Elisa實驗—試劑盒的測定方法及要求

　　測定方法

　　試劑盒，通常采用固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)進行測定。具體步驟如下：

　　?標(biāo)準(zhǔn)品稀釋與加樣?：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔，加入不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品。

　　?加樣?：設(shè)空白孔和待測樣品孔，加入樣品稀釋液和待測樣品。

　　?溫育?：用封板膜封板后置于適宜溫度(如37℃)溫育一定時間(如30分鐘)。

　　?洗滌?：揭掉封板膜，棄去液體，加入洗滌液洗滌多次。

　　?加酶?：每孔加入酶標(biāo)試劑(空白孔除外)。

　　?再次溫育和洗滌?：重復(fù)溫育和洗滌步驟。

　　?顯色?：加入顯色劑A和B，避光顯色一定時間(如15分鐘)。

　　?終止?：加入終止液終止反應(yīng)。

　　?測定?：在酶標(biāo)儀上，通常選擇450nm波長測定各孔的吸光度(OD值)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度和對應(yīng)的OD值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后根據(jù)待測樣品的OD值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查找對應(yīng)的濃度?。

　　要求

　　?樣本收集與處理?：樣本的收集和處理需嚴(yán)格按照說明書進行，如血清、血漿、組織勻漿等樣本的收集方法和保存條件。樣本應(yīng)避免溶血、高血脂等情況，并在收集后盡快進行檢測，如需保存，應(yīng)置于-20℃或-80℃冰箱中，避免反復(fù)凍融?。

　　?洗滌液配置?：洗滌液需用蒸餾水按一定比例稀釋，如1:20稀釋?。

　　?標(biāo)準(zhǔn)品配制?：標(biāo)準(zhǔn)品需進行對倍稀釋，以制備不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液?。

　　?準(zhǔn)確性、靈敏度和特異性?：試劑盒應(yīng)具有較高的準(zhǔn)確性、靈敏度和特異性，以確保檢測結(jié)果的可靠性。例如，人纖維母細胞表面抗原(FSP)ELISA試劑盒的準(zhǔn)確性通常通過標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值來衡量，要求R值大于等于0.9900;靈敏度要求檢測濃度小于0.1 ng/mL;特異性要求不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)?。

　　?重復(fù)性?：試劑盒的重復(fù)性也是衡量其質(zhì)量的重要指標(biāo)之一，通常要求板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%?。

　　?貯藏與有效期?：試劑盒應(yīng)在規(guī)定的條件下貯藏(如2-8℃，避光防潮保存)，并在有效期內(nèi)使用，以確保其性能穩(wěn)定?。

　　以上信息僅供參考，具體測定方法及要求可能因試劑盒品牌和型號的不同而有所差異，請在使用前仔細閱讀說明書并遵循其指導(dǎo)進行操作。

　　天正信達小編提醒大家：檢測前一定要仔細閱讀以上內(nèi)容，這樣可以幫助您準(zhǔn)確的測出結(jié)果。

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